Анализ ПЦР: как берут анализ на хламидии у женщин

О том, как сдавать ПЦР анализ на ЗППП, подробно расскажет врач, назначающий исследование.

Общие правила забора анализа ПЦР 12

В общем случае при заборе биоматериала из уретры:

  • наружное отверстие предварительно обрабатывают тампоном, смоченным стерильным физраствором;
  • если есть выделения гнойного характера, соскоб берут или сразу или спустя примерно 20 минут после мочеиспускания;
  • если выделения отсутствуют, предварительно зондом проводят массаж уретры;
  • забор обычно осуществляется вращательными движениями после введения зонда на глубину 1 – 1,5 см у женщин, 3 – 4 см у мужчин;
  • у детей проводится только с наружного отверстия;

Из вульвы и влагалищного преддверия:

  • забор проводят стерильным ватным тампоном;
  • в случае воспаления бартолиновых желез проводится их пункция;

Из влагалища:

забор осуществляют из заднего свода или измененных областей;

Из канала шейки матки:

  • предварительно удаляют слизь ватным тампоном и обрабатывают стерильным физраствором шейку матки;
  • зонд вводя на глубину от 5 до 15 мм;
  • при эрозивных поражения материал берут с граничной области измененная/здоровая ткань;
  • зонд извлекается строго без касания влагалищных стенок;

Из матки:

забор проводят специальным шприцеподобным инструментом;

Из маточных придатков:

образцы (тканей, экссудата, гноя) берут в ходе операции либо чрезвлагалищной пункцией.

Моча на инфекции исследуется до начала приема антибиотиков после тщательной гигиенической обработки половых органов.

Собирается примерно 5 мл средней порции.

У мужчин при диагностике простатита отдельно исследуются три порции мочи (первая и средняя, а также последняя, собираемая после массажа простаты) и секрет предстательной железы.

Секрет простаты объемом около 1 мл собирают после массажа в сухую пробирку.

Если не удается получить простатический сок, анализируют первую порцию мочи (10мл), полученную после массажа простаты.

Для исследования на сифилис методом ПЦР материал берется из лимфоузлов и зон поражения.

Поскольку для большинства ИППП гематогенный путь распространения в организме не является основным, кровь для ПЦР-диагностики используется не для всех инфекций.

Возможно выявление методом ПЦР крови ВИЧ, вирусов гепатитов.

В случае длительного сохранения после полноценной терапии положительных серореакций (результатов исследований на антитела/антигены в крови) на сифилис может проводиться ПЦР выявление в крови участков ДНК трепонем.

В ситуации, когда исследуется кровь, особой подготовки не требуется.

Как правило, анализ делают натощак.

Если количество анализируемых объектов оказывается ниже предела чувствительности стандартных тест-систем (что случается при осуществлении ПЦР крови), предварительно образец может быть сконцентрирован.

Во всех случаях исследование проводится только после прекращения использования препаратов местного действия и после полного выведения действующих веществ из организма.

С целью контроля эффективности терапии анализ делают спустя 2 недели после окончания лечения (если нет симптомов).

Метод обладает высокой чувствительностью и может выявлять остатки ДНК даже нежизнеспособных патогенных микроорганизмов.

Поэтому контрольное исследование рекомендуют повторить через месяц от даты последнего приема лекарства.

Что может находиться в мазке

Анализ соскоба, взятого из уретры здорового мужчины, содержит такие клетки:

  • Эпителий внутренней поверхности уретры – 5–10 единиц. Их увеличение также говорит о воспалительном процессе, потому что во время воспаления ускоряется отшелушивание эпителия. Если есть измененные клетки – это признак новообразования.
  • Лейкоциты. Это клетки иммунной системы, в количестве 0–5 в поле зрения. Увеличение их числа говорит о возможном воспалении и развитии простатита или уретрита.

В мочеиспускательном канале для его увлажнения находится слизь, поэтому небольшое ее количество присутствует в анализе. Количество слизи обозначается несколькими знаками «плюс». В норме допускается обозначение «++». Большее количество значков свидетельствует о присутствии инфекции.

Допускаются такие патогенные микроорганизмы, как кокки (кроме гонококков). Они относятся к группе условно патогенных микробов и провоцируют заболевание при благоприятных для них условиях. Повышенное их содержание является признаком уретрита.

Читайте также:  Симптомы гонококков у мужчин и женщин.

Никаких других патогенных микроорганизмов в соскобе быть не должно.

Сдача анализов и расшифровка результатов

Как сдавать кровь на хламидиоз? И в случае ПЦР, и при исследовании различных иммуноглобулинов никаких особенных условий для сдачи выполнять не нужно. Главное условие — минимум 4 часовое голодание после приема пищи. Поэтому анализы крови на хламидиоз можно сдавать утром натощак, после ночного сна, на обычных условиях.

Какие результаты анализов возможно получить в норме, и какова их расшифровка при заболевании различными формами хламидиоза?

Сдача анализов и расшифровка результатов

При выполнении полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, выдаётся качественный ответ, который говорит о том, обнаружен ли возбудитель в плазме крови или его следов там нет. Соответственно, в первом случае однозначно можно ставить диагноз хламидиозной инфекции, а во втором — это может быть как отсутствие хламидиоза, так и наличие чрезвычайно малого количества возбудителей, которое ниже возможности метода, но это маловероятный результат.

При положительных значениях ПЦР, в дальнейшем проводится диагностический поиск, чтобы определить первичную локализацию возбудителя. Поскольку нахождение хламидий в крови означает только тот факт, что ими был преодолен гистогематический барьер, то в кровь они могли попасть, откуда угодно: из ротоглотки, из уретры, из заднего прохода, или из легких, смотря, где возник первичный очаг внедрения возбудителя в организм.

Антитела – иммуноглобулины классов М, G, A

Сдача анализов и расшифровка результатов

При остром процессе первыми в организме появляются антитела класса М. Это свидетельствует о раннем периоде, либо о случае обострения хронической хламидийной инфекции. Как различить эти два состояния?

  • Если высокий титр Ig M сочетаются с низкими титрами иммуноглобулинов G, то это говорит о первичном заражении и свежести инфекционного процесса;
  • Если высокий титр иммуноглобулина М совпадает с повышенным титром иммуноглобулинов G, то это говорит о хронизации.

В некоторых случаях производят анализ крови на секреторные иммуноглобулины класса А. Их задача — защищать различные слизистой оболочки от более глубокого внедрения хламидий, чтобы они не появились в крови. Эти антитела также являются маркером острой инфекции, или обострения хронического процесса. Срок их появления – несколько дней с момента первичного заражения хламидиозом. Конечно, лучше всего брать иммуноглобулины класса А непосредственно со слизистых, поскольку именно там их концентрация выше всего, Но они вполне определяются их периферической крови.

Сдача анализов и расшифровка результатов

После заражения максимальное значение иммуноглобулинов А проявляется в течение месяца, а через три месяца их титр снижается. Такие факты, как повторное заражение и обострение хронического процесса вновь вызывает повышение титра этих антител. Если хламидии попадают в кровь, титр этих антител снижается, поскольку прорвана иммунная защита слизистых, а при поверхностных формах заболевания, когда гистогематический барьер ещё не нарушен, эти секреторные иммуноглобулины класса А вырабатываются на протяжении всего периода заболевания, что можно различить в результатах анализов.

«Долгоиграющие» иммуноглобулины класса G называются маркером длительно текущей, или уже перенесенной инфекции. Учитывая предыдущие данные, вы сами без труда расшифруете различные варианты их интерпретации. В среднем, Ig G возникают в крови через 2,5 недели после попадания в организм возбудителя. Но активность иммунитета, вызванного этими антителами, является нестойкой.

После выздоровления антитела могут циркулировать в крови иногда годы, а иногда и всю жизнь. Если хронический процесс протекает с очень низкой активностью, или пациент выздоровел, то их титр снижается. При обострениях процесса титр нарастает вновь, и в случае четырехкратного роста значений можно уверенно говорить о реактивации процесса.

Сдача анализов и расшифровка результатов

В заключение следует сказать о форме выдачи результатов анализов. Многие пациенты привыкли, что патология, и расшифровка нормы, выдается в форме таблицы — цифровых значений. Относительно хламидиоза это не так. ПЦР является качественной реакцией, которая даёт ответ «да, выявлено» или «нет, не выявлено». У антител существует три варианта: результат отрицательный сомнительный и положительный.

Этого вполне достаточно для диагностики, но также в результатах анализов может выдаваться особое значение, который именуется «коэффициентом позитивности». Этот коэффициент показывает, насколько близко значение результатов пробы пациента к пороговым значениям, при которых вообще может определяться антитела. Чем дальше отстоит этот коэффициент от порогового значения, тем больше достоверность исследования. Этот коэффициент может только подтвердить уверенность врача в том, что у пациента нет ложноположительной реакции, поскольку коэффициент позитивности достаточно высок.

Сдача анализов и расшифровка результатов

Какие биоматериалы необходимы для ПЦР-исследования

Материалом для исследования методом ПЦР могут быть различные биологические материалы: кровь, слизь, моча, мокрота, соскоб эпителиальных клеток, ткань плаценты, сок простаты, плевральная жидкость, околоплодные воды. Для выявления инфекций, передающихся половым путем у женщин и мужчин берутся выделения из половых органов: соскоб или мазок из шейки матки, из уретры (мочеиспускательный канал), моча. У ребенка материал для исследования берется из отверстия уретры. Чтобы сделать исследование методом ПЦР на герпетические инфекции, цитомегаловирус, гепатиты В, С, токсоплазмоз, ВИЧ-инфекцию, у пациента берут кровь. Для выявления инфекционного мононуклеоза, цитомегаловируса, герпетической инфекции также берется мазок из зева, При поражениях нервной системы берется спинномозговая жидкость, при диагностике внутриутробных инфекций – ткани плаценты, околоплодные воды, в пульмонологии материалом для ПЦР является плевральная жидкость, мокрота.

Читайте также:  Азитромицин или доксициклин при хламидиозе: что лучше?

КакПросто рекомендует

Почему лекарство не работает Залог успешного лечения – это, конечно же, соблюдение всех рекомендаций врача и информирование его обо всех значимых изменениях в ходе терапии. Однако специалист может сколько угодно говорить о схеме и длительности приема препарата, но большинство пациентов все же нарушат эти правила. Читать далее

При обследовании на ЦМВИ дополнительно забирается моча.

Ложноотрицательный анализ на хламидиоз

Таким считается анализ, который дает отрицательный результат у человека, зараженного хламидиями.

Вероятность его высокая при любых диагностических тестах, за исключением ПЦР.

Она составляет 25-50% при использовании ПИФ или бактериологического посева.

Возможные причины:

  • материал получен из участка тела, где нет возбудителя;
  • слишком маленькое количество хламидий в мазке;
  • неправильный забор биоматериала;
  • неправильная подготовка к анализам;
  • человеческий фактор.

В связи с недостаточной чувствительностью большинства анализов, методикой выбора для диагностики хламидийной инфекции остается ПЦР.

ПИФ на хламидии

Выявляются хламидийные антигены.

Препарат обрабатывают меченными флюоресцеином антителами. Они окрашивают цитоплазму в красный.

Под микроскопом хламидии визуализируются в виде зеленоватых включений. Они представляют собой элементарные тельца.

Преимущества ПИФ:

  • исследование проводится быстро
  • простой в исполнении
  • высокая специфичность – 98%

Минус – маленькая чувствительность в сравнении с ПЦР. Она составляет лишь 55-75%.

Процесс диагностики проходит вручную, его нельзя автоматизировать. Исследоваться могут только мазки из уретры или цервикального канала.

Любой другой материал исследованию не подлежит. Потому что при малых концентрациях зараженных хламидиями клеток ПИФ даст ложноотрицательный результат.

Подготовка к тесту

Кровь на хламидии, как и большинство исследований, сдается строго натощак. Перед исследованием следует обязательно уведомить врача обо всех принимаемых медицинских препаратах, БАДах и витаминных комплексах. Также следует честно ответить на вопросы о сексуальных контактах и количестве половых партнеров. Доктор может задать вопросы об условиях жизни пациента и другие уточняющие моменты. По тесту на хламидии расшифровка анализа напрямую зависит от того, придерживался ли пациент рекомендаций врача по подготовке к исследованию. Общие рекомендации таковы.

  • Не принимать пищу в течение 8-12 часов до сдачи крови.
  • В день забора крови не следует курить.
  • На состав крови может повлиять стресс и волнение. В результате нервозности повышается уровень лейкоцитов, гормонов и некоторых ферментов, результат анализа может быть искажен.
  • Проводить сдача мазка женщинам следует не раньше, чем через 5 дней после окончания менструации.
  • Мужчинам перед сдачей биологического образца из уретры следует удерживаться от мочеиспускания в течение часа.
  • Для анализа мочи используется «средний» образец. Перед процедурой следует помыться без использования мыла или других средств гигиены. Достаточно 50 мл жидкости.
Читайте также:  Пижма от глистов: как принимать, рецепты, отзывы паразитологов

Выявление хламидий в культуре клеток (на среде McCoy)

Этот метод уникален тем, что позволяет оценить не только качество проведенной терапии, но и определить чувствительность хламидий к различным группам антибактериальных препаратов.

Суть метода состоит в заражении обработанной культуры клеток забранным материалом с последующим посевом на питательную среду и инкубированием в течение двух суток. Наличие хламидий в полученных клетках определяется методом ПЦР.

Для определения чувствительности к антибиотикам в обработанную культуру клеток вносят ростовую среду с содержанием определенного антибактериального средства и инкубируют в течение 5 суток.

Выявление хламидий в культуре клеток (на среде McCoy)

Эффективность препарата определяют по отсутствию или замедлению роста в определенных группах. Наличие роста свидетельствует о резистентности к добавленному в  питательную среду антибиотику.

Недостатки этого метода диагностики — длительность (7 дней) и дороговизна, поэтому в клинической практике он используется в крайне редко. Обычно показанием для его назначения служит длительная неэффективная антибактериальная терапия.

Какой материал необходимо сдать для анализа

Для того, чтобы успешно провести тестирование образца при помощи полимеразной цепной реакции на хламидии, достаточно небольшого объема материала, что является еще одним преимуществом. Для диагностики подходит большинство биологических жидкостей, кровь и образцы мягких тканей.

У мужчин для определения хламидий берут:

  • мазок из уретры;
  • мазок из конъюнктивы;
  • сперму;
  • мочу;
  • жидкость из предстательной железы;
  • синовиальную жидкость.

Материалом, который берут для исследования у женщин, является:

  • соскоб из уретры;
  • эпителий из цервикального канала;
  • моча;
  • мазок из конъюнктивы;
  • синовиальная жидкость.

Кровь берется из локтевой вены на руке, достаточно 10-15 мл. В современных лабораториях для этого используют специальные вакуумные системы, которые предотвращают попадание посторонних микробов в образец, увеличивая тем самым точность результатов.

Если необходим образец синовиальной жидкости, то делают пункцию суставного аппарата специальной толстой иглой с диаметром 0,8 мм. Введение этой иглы проходит болезненно, поэтому иногда перед введением применяют местное обезболивание.

Биоматериал могут отобрать в лаборатории, а могут делать отбор проб непосредственно в поликлинике или больнице, после чего направлять его на тестирование в ПЦР лабораторию. Некоторые частные диагностические центры за дополнительную плату берут образцы для исследования на дому у пациента.

Для оценки заражения околоплодных вод хламидиями во время беременности отбирают небольшое количество амниотической жидкости. Делают это только при острой необходимости, так как методика несет небольшую опасность для протекания беременности. Для этого производят прокол брюшной полости и под контролем УЗИ отбирают необходимое количество околоплодных вод.

Для всех беременных при постановке на учет в женскую консультацию назначают обследование на наличие хламидий в крови, для чего проводят ПЦР-тестирование, поскольку хламидиоз является тяжелой TORCH-инфекцией, способной нарушить ход беременности и осложнить развитие плода. Для такого типа обследования всегда используют кровь из вены.

Источники

  • -na-hlamidii
  • -na-xlamidii/
  • -na-hlamidii
  • -boleznej/bakterialnye-infektsii/hlamidioz/

[свернуть]

Преимущества ПЦР исследования

Часто представители сильного пола интересуются вопросом о том, почему рекомендуется именно сдать ПЦР на инфекции. А не любой другой анализ, способный помочь в постановке верного диагноза.

Причин тому несколько, и все их называют преимуществами ПЦР диагностики:

Преимущества ПЦР исследования
  • простота подготовительных мероприятий, при которых не требуется никаких жестких ограничений, требуется лишь соблюдение стандартных требований, которые мало у кого вызывают серьезные трудности, особенно если человек заботится о своем здоровье
  • проведение амплификации позволяет многократно умножить количество выделенных фрагментов, благодаря чему вероятность диагностической ошибки в значительной мере снижается
  • использование современных баз данных по тем или иным возбудителям позволяет сделать анализ высокоточным, легко среди множества генетических кодов определить необходимые с помощью специальных программ
  • минимальное влияние на исследование человеческого фактора также позволяет получить достоверные результаты, благодаря чему вероятность ошибки сильно снижается

Однако среди недостатков полимеразной цепной реакции стоит упомянуть сравнительную дороговизну исследования. Из-за этой особенности все еще нет возможности использовать его в качестве скринингового метода.

Медпаркер - медицинский портал